Спектры флуоресценции и состав флуорофоров липофусциновых гранул ретинального пигментного эпителия кадаверных глаз в двух случаях визуализируемой абиотрофии

При посмертном осмотре глазных бокалов кадаверных глаз в 2 случаях в РПЭ были обнаружены признаки ВМД. Для сравнения с нормой относительного содержания флуорофоров ЛГ из РПЭ данных образцов нами были отобраны кадаверные глаза без признаков патологии от доноров, близких по возрасту к донорами кадаверных глаз с признаками ВМД. РПЭ кадаверного глаза без патологии (норма) является равномерным, без очаговой патологии, в макулярной (фовеолярной) зоне имеется характерная более насыщенная (интенсивная) пигментация клеток. РПЭ глазного дна с признаками ВМД (патология) является неравномерным, разряженным, наблюдается картина «паркетного» глазного дна, в макулярной и па-рамакулярной зоне можно видеть перераспределение пигмента, множественные друзоподобные отложения в виде желтоватых слегка проминирующих образований с неровными границами, окруженные зоной гиперпигментации, без тенденций к слиянию.

Из отобранных кадаверных глаз были получены суспензии клеток РПЭ и зарегистрированы их спектры флуоресценции (рис. 11А). Сравнительный флуоресцентный анализ показал, что при наличии патологии в РПЭ максимумы спектров флуоресценции суспензии клеток РПЭ сдвинуты в коротковолновую область по сравнению с образцами, полученными из кадаверных глаз без патологии. Это может указывать на повышенное содержание продуктов фотоокисления и фотодеградации А2Е в ЛГ. Более ощутимой является разница в положении максимума для пары а-б (564-528 нм, соответственно). Для второй пары в-г эта разница составила 563-540 нм, соответственно.

Из суспензии клеток РПЭ анализируемых образцов были получены хлороформные экстракты и методом ВЭЖХ проанализирован состав флуорофоров и их относительное содержание в этих хлороформных экстрактах (рис. 11Б; см. табл. 5).

Сравнительный ВЭЖХ-анализ хлороформных экстрактов показал различие в относительном содержании флуорофоров ЛГ в РПЭ кадаверного глаза в норме и при патологии. В образцах, полученных из кадаверных глаз с визуально наблюдаемыми признаками ВМД, набор пиков для фракции 1, как можно видеть, более разнообразный, хотя их относительное содержание практически в 2 раза меньше (см. рис. 11Б, табл. 5). Наблюдается также увеличение относительного содержания флуорофоров из фракции 2 и увеличение относительного содержания А2Е (пик 6). Таким образом, с одной стороны, показано увеличение с возрастом доноров относительного содержания как самого А2Е, так и А2Еох,deg в хлороформных экстрактах, полученных из РПЭ индивидуальных кадаверных глаз без видимых патологий. С другой стороны, при наличии визуально наблюдаемых патологий в РПЭ видно изменение относительного состава флуорофоров хлороформного экстракта из РПЭ, а именно: уменьшение относительного содержания продуктов 1-й группы пиков, увеличение относительного содержания продуктов 2-й группы пиков (1-я и 2-я группы пиков, как мы предполагаем, могут быть продуктами фотоокисления и фотодеградации А2Е-А2Еох,deg) и увеличение содержания А2Е. При этом меняется (смещается в коротковолновую область максимум спектра) и суммарный спектр флуоресценции суспензии клеток РПЭ.

Таким образом, сравнительный ВЭЖХ-анализ показал, что изучение качественного и количественного состава флуорофоров ЛГ в норме и при патологии становится актуальным и может являться предметом дальнейших исследований. He исключено, что при некоторых патологиях содержание А2Е и продуктов его фотоокисления и фотодеградации может существенно отличаться от нормы.