Сравнительное изучение времени жизни в плазме крови крысы пептидов TGENHR и TGENHR-NH2

Декабрь 8, 2015 / Комментарии 0

Для анализа биотрансформации пептидов TGENHR и TGENHR-NH, использовалась ВЭЖХ продуктов взаимодействия [3H]TGENHR и [3HjTGENHR-NH2 с гепариновой плазмой крови и мембранами клеток головного мозга крысы. Для хроматографии использовались последовательно соединенные УФ-детектор и проточный детектор по радиоактивности. Хроматографию проводили на колонке Кромасил С18, 150×4, 4 мкм в градиенте метанола (0-30%) в присутствии 0,1-процентной смеси трифторуксусной и гептафтормасляных кислот (4:1). Для идентификации пептидных фрагментов, образующихся при различных путях биотрансформации пептида [3H]TGENHR и [3H]TGENHR-NH2 в плазме крови крысы, были синтезированы 2-5-членные пептидные фрагменты, образующиеся при различных путях биодеградации с N- и С-конца пептидной цепи. С использование меченных тритием пептидов [3H]TGENHR и [3H] TGENHR-NH2 была определена фармакокинетика пептидов TGENHR и TGENHR-NH2 в гепариновой плазме крови с исходной концентрацией 2.5 мкМ (рис. 2-5).

р2 р3

В результате проведенных исследований было найдено, что пептид TGENHR-NH2 обладает высокой устойчивостью к гидролизу в плазме крови. Период его полудеградации составляет 21 минуту, что в несколько раз больше, чем в случае пептидаТGENHR, не имеющего амидной защиты С-конца пептидной цепи. Период полудеградации пептида TGENHR составляет 2 минуты, что находится на уровне пептидов Семаке и Селанк, также обладающих нейропротекторными свойствами (рис. 6, 7).

р6

Гидролиз пептида TGENHR-NH2 происходит с N-конца пептидной цепи и основной вклад в его гидролиз в плазме крови вносят диаминопептидазы. Основные продукты гидролиза тетрапептид — ENHR-NH2 и дипептид HR-NH2. Гидролиз пептида TGENHR происходит с N-конца пептидной цепи и основной вклад в его гидролиз в плазме крови вносят дикарборксипептидазы. Основные продукты гидролиза — тетрапептид TGEN и дипептид HR. Также было обнаружено, что в буфере, используемом для радиолигандиого анализа, пептиды обнаруживают высокую стабильность при взаимодействии с мембранами клеток головного мозга крысы (рис. 8). После взаимодействия пептида с мембранным препаратом в течение 90 минут при 37°С сохраняется более 80% меченного тритием пептида [3H]TGENHR-NH2. Таким образом, было показано, что эти условия могут быть использованы при выборе параметров радиолигандиого связывания. Был поведен анализ нейропротекторной активности пептидов ENHR-NH2 и дипептида HR-NH2, показавший, что пептид HR-NH2 является активным метаболитом, обладающим высокой ноотропной активностью, соизмеримой с активностью пептида TGeNHR-NH2.

р8

Подпишитесь на свежую email рассылку сайта!

Читайте также