Спектральные характеристики флуорофоров липофусциновых гранул

Декабрь 8, 2015 / Комментарии 0

Считается, что А2Е вносит основной вклад в суммарную картину аутофлуоресценции глазного дна. Вопрос о вкладе других флуорофоров в картину аутофлуоресценции глазного дна остается открытым. Вполне вероятно, что при старении, при разных формах дегенеративных заболеваний сетчатки и РПЭ и на различных стадиях патологического процесса содержание флуорофоров в ЛГ или их соотношение может меняться. Так, например, гипераутофлуоресценция при некоторых патологиях может быть вызвана повышенным содержанием продуктов фотоокисления А2Е, которые токсичны и в отсутствие света.

Спектральные свойства отдельных флуорофоров (или их групп) и оценка их вклада в суммарный спектр флуоресценции ЛГ были исследованы нами при помощи методов флуорометрии, спектрофотометрии, ВЭЖХ и микроскопии ближнего поля. Для качественной оценки флуорофоров ЛГ были зарегистрированы спектры возбуждения флуоресценции при эмиссии на 335, 450 и 500 нм. Спектр возбуждения с флуоресценцией на 335 нм имеет максимум в области 280 нм. Скорее всего, он принадлежит белковой составляющей ЛГ — флуоресценции триптофана. Спектры возбуждения с флуоресценцией на 450 и 500 нм имеют максимумы в области 270, 350 и 450 нм. Можно предположить, что коротковолновый максимум в области 270 нм принадлежит окисленным формам производных ПТР, а максимумы в области 350 и 450 нм принадлежат производным ПТР, таким как, например, А2Е и ПТР-димер. При этом существенный вклад в суммарный спектр флуоресценции вносят продукты, поглощающие в ультрафиолетовой области. В силу спектральных характеристик хрусталика и других внутриглазных светофильтров возбуждать эти продукты в ситуации in vivo не представляется возможным. Исследовать in vivo их можно было бы в тех редких случаях, когда у пациента имплантирована бесцветная УФ-поглощающая интраокулярная линза. Такие случаи в офтальмологической клинической практике встречаются. При регистрации картины аутофлуоресценции глазного дна у таких пациентов оценка вклада коротковолновых продуктов могла бы дать важную диагностическую информацию о патогенезе дегенеративных заболеваний сетчатки.

р5

На рис. 5А представлены спектры поглощения суспензии ЛГ в фосфатном буфере (1) и хлороформного экстракта из ЛГ (2). Видно, что хлороформная фракция содержит вещества с максимумами поглощения в области 280 нм, 340 нм и 430 нм. Методом ВЭЖХ были определены спектральные характеристики отдельных компонентов хлороформного экстракта из ЛГ. На рис. 5Б представлена хроматограмма хлороформного экстракта ЛГ при детектировании на длине волны 430 нм. Видно, что образец содержит довольно большое количество компонентов. Нами были идентифицированы А2Е (пик № 15), iso-A2E (пик № 17), а также окисленные формы А2Е (пики №№ 12 и 13). Природа пиков (1-11) с меньшими временами удерживания не известна. Аналогичные пики появляются на хроматограмме при облучении синтетического А2Е белым светом в течение 2 часов. Вероятнее всего — это продукты (фото)окисления и фотодеградации А2Е. Фракции 18 и 19 могут содержать такие производные ПТР, как A2-DHP-PE и A2-DHP-E, ATR-dimer, ATR-dimer-E и ATR-dimer-PE, а также А2-GPE.

Для определения спектральных характеристик детектируемых веществ нами были отобраны фракции /а-з/ и зарегистрированы их спектры поглощения. Доминирующими продуктами по поглощению в видимой области спектра (400-500 нм) являются А2Е (пик № 15), iso-A2E (пик № 17) и окисленные формы А2Е (фракция /е/, пики 12 и 13). Фракции /а-д/ в большей степени поглощают в ультрафиолетовой области и в меньшей степени — в области 400 нм. Фракция /з/ состоит из группы веществ, поглощающих как в коротковолновой области спектра (в области 300 нм), так и в длинноволновой (в области 500-600 нм).

Полученные нами результаты указывают на то, что в суммарную картину аутофлуоресценции глазного дна могут вносить вклад довольно большое количество флуорофоров, представляющих собой конъюгаты ПТР различной природы.

Подпишитесь на свежую email рассылку сайта!

Читайте также