Разработка метода синтеза и получения радиоактивно меченных тритием образцов пептида HLDF-6

Декабрь 8, 2015 / Комментарии 0

Реакцию BTKHO с газообразным тритием или дейтерием проводили при температуре 120-200°С в твердой смеси, образованной органическим веществом, нанесенным на неорганический носитель, и высокодисперсным катализатором платиновой группы. Пептид в количестве 1.0 мг растворяли в 1 мл воды и смешивали с 20 мг неорганического носителя. Воду удаляли при уменьшенном давлении при 20°С. Неорганический носитель с нанесенным препаратом смешивали с 10 мг гетерогенного катализатора платиновой группы. В ампулу объемом 10 мл помещали полученную твердую смесь, вакуумировали, заполняли газообразным тритием до давления 250 торр и проводили реакцию BTKHO при повышенной температуре. Ампулу охлаждали, вакуумировали, продували водородом. Пептид десорбировали 20-процентным водным этанолом. Для удаления лабильного трития меченый пептид еще дважды растворяли в 20-процентном водном этаноле и упаривали досуха. Хроматографическую очистку проводили с помощью ВЭЖХ на колонке Кромасил в градиенте метанола в присутствии 0,1-процентной гептафтормасляной кислоты. Пептид упаривали и растворяли в этаноле. Реакция ВТКИО происходит в твердой фазе на новых кислотных центрах, образующихся под действием спилловер-водорода. Изотопный обмен водорода происходит по электрофильному одноцентровому синхронному механизму с образованием в переходном состоянии реакции пятикоординированного углеродного атома, при котором образуется трехцентровая связь между углеродом и обменивающимися водородными атомами. Реакция происходит с сохранением конфигурации асимметрического углеродного атома, что позволяет избежать рацемизации при изотопном обмене. Исследовано взаимодействие пептидов TGENHR и TGENHR-NH, с дейтерием и тритием в реакции ВТКИО. Были исследованы влияние состава и соотношения компонентов твердой фазы, выбора гетерогенного катализатора платиновой группы, температуры и длительности реакции на величину выхода и включение изотопов водорода в пептиды TGENHR и TGeNHR-NH2. В результате были найдены условия реакции ВТКИО, позволяющие получить меченные тритием пептиды [3H]TGENHR и [3Н]ТGENH R-NH, с молярной радиоактивностью 60 и 70 Ки/ммоль. Для получения меченных тритием пептидов [3H]TGENHR и [3H]TGENH R-NН , была использована уникальная цельнопаяная установка по обмену водорода на тритий OBT-1 (ИМГ РАН). Изотопомерный состав меченых пептидов изучался в твердофазной реакции с газообразным дейтерием. Реакцией ВТКИО был получен меченный дейтерием пептид [2H]TGENHR, содержащий около 3 атомов дейтерия на молекулу (рис. 1).

р1

Подпишитесь на свежую email рассылку сайта!

Читайте также